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不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较

发布时间: 2024-03-04

    

GB4789.4-202*《食品安全国家标准 食品微生物检验 沙门氏菌检验》征求意见稿和2023版《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》[1],最大的变动之一是将SC更换为RVS。 RVS作为一个新的培养基被列入了食品安全国家标准的检测行列,但GB4789.28-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基与试剂的质量要求》[2]及其征求意见稿中均未列入该培养基,如何对其进行质控?各厂家的RVS增菌效果是否相同?对此,我们做了相关验证。


   不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较


 

RVS肉汤的原理


培养基中大豆胨提供菌体细胞生长所需的碳源、氮源等;氯盐可以提高培养基体系的渗透压,磷酸盐作为缓冲体系维持培养基酸性环境(pH 5.2±0.2),孔雀绿可以抑制非沙门氏菌属细菌的生长。该培养基的选择性表现在高渗透压、低pH值以及孔雀绿的抑菌效果[3]


不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较


不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较

图:3:RVS肉汤

 

RVS肉汤的质控方法及比对结果


对比国内外5个厂家(A B C D E,其中A为陆桥)的RVS增菌液,按照GB 4789.28-2013 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》附录D中SC增菌液的质控方法,对RVS增菌液进行验证,结果无显著性差异。

 

RVS肉汤的进一步验证


各厂家RVS增菌液质控结果无显著性差异,是否在实际检验中增菌效果就一致呢?样品中通常含有大量的杂菌,我们模拟实际检测将非目标菌含量提高,参考质控方法,选用不同血清型的沙门氏菌与大肠埃希氏菌ATCC25922混合。选择低于标准要求的16h和标准范围内的20h,观察增菌速度和增菌效果,开展了进一步的验证试验。

 

实验方法:


不同血清型的沙门氏菌(接种量小于50CFU)与大肠埃希氏菌ATCC25922 (接种量为106CFU)混合后接种RVS增菌液,于42℃±1℃培养,分别于16h和20h取增菌液,稀释到适宜浓度后转接到沙门氏菌显色(SA)(陆桥二代)平板上进行计数,观察目标菌和非目标菌的生长情况。在SA培养基上,目标菌沙门氏菌呈紫红色,大肠埃希氏菌为无色。

 


菌株信息:


不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较 

 

结果: 


对于ATCC14028,CMCC(B)50976和CICC25045,厂家A和厂家D对目标菌的增菌效果最优,厂家A、D、E的抑制性最优。(见附录1 以ATCC14028为例)


对于ATCC29934,ATCC12325,CMCC50115和ATCC13076,厂家A对目标菌增菌效果最优,厂家A和D的抑制性最优。(见附录2 以ATCC12325为例)

 

结论:


由多个实验结果可以得出,综合7株沙门氏菌的增菌效果和大肠埃希氏菌的抑制性,厂家A(陆桥)最佳。厂家A(陆桥)可较好的抑制非目标菌--大肠埃希氏菌的生长,有效避免了其对沙门氏菌产生的竞争性抑制,同时能够保证目标菌沙门氏菌良好的促生长能力。


  厂家B和厂家C的表现基本一致,主要是抑制性较差,按照该实验方法,7次混菌实验都有大量非目标菌的生长,这会增加日常检测的工作量,且对于肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种存在漏检的风险。


  厂家D的表现与厂家A相似,但是对于肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型CMCC(B)50115和肠道沙门氏菌亚种ATCC13076生长较差,对于肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种ATCC29934和ATCC12325的增菌速度慢且数量少,也存在漏检风险。


厂家E的主要问题是对大多数目标菌的增菌能力较弱,有时会低其他厂家1个数量级。

 


附录1:

 


不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较 


不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较

图4:培养16h,5个厂家接种混菌ATCC14028+ATCC25922的生长情况,涂布SA

从上到下依次为A B C D E


不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较

图5:培养20h,5个厂家接种混菌ATCC14028+ATCC25922的生长情况,涂布SA

从上到下依次为A B C D E

 

 

附录2:

不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较

 

不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较 

图6:厂家A(陆桥)在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生长情况



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图7:厂家B在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生长情况


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图8:厂家C在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生长情况


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图9:厂家D在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生长情况

 


不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较

图10:厂家E在16h(上)和20h(下)的混菌ATCC12325+ATCC25922生长情况

    

 

 

附录:3

不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较

 

不同厂家RVS肉汤增菌效果的比较

参考文献

[1]2023年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册[S]

[2] GB4789.28-2013,《食品安全国家标准 培养基与试剂的检查要求》[S]

[3]李瑾,刘振,何艳玲.微生物干粉培养基质控图解手册[M].北京科学技术出版社,2007.